Basic HTML Version
6
◊
Haemophilia
Mozaik
|
Plazma eredetû és rekombináns FVIII összehasonlítása
|
eltávolítása hatására jelentôsen (akár 20-szoros mértékben) nô
az mRNS-expresszió, ugyanakkor ez fehérje szinten mindösz-
sze csak kétszeres emelkedést jelentett. Az mRNS-rôl megvaló-
suló fehérjeszintézist (transzláció) követôen megindul a szig-
nál polipeptidlánc sejten belüli vándorlása és további módosí-
tása, elsô lépésként az endoplazmás retikulum (ER) lumenébe.
Itt következik be a glikoziláció 14 cukormolekulát tartalmazó,
elágazódó oldalláncok hozzáadásával az aszparagin aminosav
oldalláncokhoz, amelyek 75%-a a B doménben található. Az
elágazódó cukor oldalláncok stabilizálják a feltekeredett fehér-
jét, gátolják a feltekeredés (folding) folyamán jelen levô köztes
formák aggregálódását és elôsegítik a fehérje kölcsönhatását az
ER-chaperonokkal (calnexin, calreticulin). A cukor oldalláncok
hiányában jelentôsen csökken a FVIII fehérje szekréciója. A
megfelelôen feltekeredett fehérje vezikulumokban vándorol a
Golgi-apparátusba, ahol egy szállításra specializálódott recep-
torkomplex alakul ki az 1. típusú mannózkötô lektin (LMAN1,
más néven ERGIC-53) és a 2. típusú multiplex koagulációs fak-
tor deficiencia fehérje (MCFD2) részvételével. Ez utóbbi köl-
csönhatásokhoz nélkülözhetetlen a FVIII fehérje B doménje. A
komplex kialakulását követôen intracelluláris proteolízis
következik be, amelynek eredménye a FVIII fehérje nehéz,
illetve könnyû láncú variánsainak kialakulása. Szintén bekö-
vetkezik az N-kötött cukor oldalláncok módosítása, az
O-glikoziláció és a tirozin oldalláncok szulfatálása. B domén
hiányában maga a szekréciós folyamat is kevésbé hatékony.
A FVIII fehérje sorsa a keringésben
A FVIII fehérje heterodimer formájában kerül kiválasztásra
egy 80 kDa molekulatömegû könnyû (A3-C1-C2 domének), és
egy 90–120 kDa molekulatömegû nehéz lánc (A1-A2-B domé-
nek) két vegyértékû fémionok révén megvalósuló kapcsolódá-
sa esetén. A nehéz lánc méretének változatossága a B domén
különbözô mértékû proteolitikus hasításából ered. A leggyak-
rabban jelen levô forma a B doménbôl 572 aminosavat tartal-
maz, amelynek szerepe lehet a könnyû és a nehéz lánc kapcso-
lódásának fenntartásában és ezáltal a plazma-féléletidô fenn-
tartásában. A FVIII heterodimer közvetlenül a szekréciót
követôen erôs, nem kovalens kapcsolattal
kapcsolódik a von Willebrand-faktor (VWF)
fehérjével, amely fontos szerepet játszik a
FVIII védelmében a korai aktivációval, illet-
ve kiürüléssel szemben. Ebben a kötôdés-
ben nem vesz részt a B domén. A FVIII
fehérje a trombin által katalizált proteolízis
révén aktiválódik összesen 5 arginin oldal-
lánc melletti hasítással. Egyes kutatásokban ez a proteolitikus
hasítási folyamat kismértékû különbséget mutatott B-domén-
hiányos FVIII esetén, ugyanakkor más vizsgálatokban ilyen
eltéréseket nem észleltek. Ugyanakkor fokozott affinitású vér-
lemezke-kötôdést észleltek B-domén-hiányos FVIII jelenlété-
ben. A FVIIIa inaktivációja további proteolitikus hasítás révén
valósul meg trombin, FIXa, FXa, illetve aktivált protein C
(aPC) részvételével. Annak ellenére, hogy a FVIIIa fehérje nem
tartalmazza a B domént, a B-domén-hiányos FVIII esetében
jelentôsen gyorsabb proteolitikus inaktivációt észleltek a nor-
mál FVIII fehérjéhez képest. A paradox jelenség hátterének
tisztázásához további kutatások szükségesek.
A szerzô következtetése szerint a FVIII B domén legfonto-
sabb szerepe a fehérje sejten belüli vándorlásában azonosítha-
tó, ugyanakkor egyes megfigyelések arra utalnak, hogy a plaz-
mában is játszhat bizonyos, feltehetôen finom szabályozó sze-
repet, amelynek tisztázásához további kutatások szükségesek.
A B-domén-hiányos FVIII szerepének pontos megismerése
nemcsak a szubsztitúciós terápiához nélkülözhetetlen, hanem
jelentôsen befolyásolhatja a génterápiás lehetôségeket is.
Írásunk az alábbi közlemény alapján készült:
Pipe SW. Functional roles of the factor VIII B domain.
Haemophilia
2009;15(6):1187–96. Epub 2009 Apr 7.
Kessler CM, Gill JC, White GC, Shapiro A, Arkin S, Roth DA,
Meng X, Lusher JM
A rekombináns, B-domén-hiányos
FVIII készítmények bioekvivalensek
a monoklonális antitesttel
tisztított FVIII koncentrátummal
Részletes farmakokinetikai paraméterek a kétféle
készítményre
Bevezetés
AhaemophiliaAkezelésében a kevert emberi plazmából tisz-
tított VIII. alvadási faktor (FVIII) koncentrátum mellett napja-
inkra elterjedtté váltak a genetikai úton elôállított készítmé-
nyek. A rekombináns FVIII (rFVIII) készít-
mények alkalmazása esetén jelentôsen csök-
kennek a plazma eredetû faktorkoncentrátu-
mokra jellemzô kockázatok (pl. a vérrel terje-
dô fertôzô betegségek átvitele, a pirogén
anyagokkal, illetve kontaminációs fehérjék-
kel kapcsolatos allergiás reakciók). Mintegy
két évtizede ismert, hogy a FVIII B doménjé-
nek eltávolítása esetén jelentôsen nô a termelhetô fehérjemeny-
nyiség a molekula biológiai aktivitásának (a véralvadási kasz-
kád aktiválása) csökkenése nélkül. Ennek megfelelôen megszü-
letett a B-domén-hiányos VIII. alvadási faktor (BDDrFVIII,
Haemophilia
A vizsgált
készítmények azonos
bioekvivalencájúak.